摘要：
目的:研究桑黄素对糖尿病血管炎性病变的作用及其分子机制.方法:①选取24只db/db小鼠,随机分为模型组(高糖高脂饲料)12只和桑黄素治疗组(高糖高脂饲料+腹腔注射40 mg/kg桑黄素)12只,另设12只C57BL/6J小鼠作为正常对照组(正常饲料).各组均给予相应干预,连续12周.末次给药后,分离腹主动脉.HE染色后光镜下观察血管组织形态学变化,PCR检测血管组织Krüppel样因子5(KLF5)和白介素-6(IL-6)的mRNA表达水平.②采用不同浓度的葡萄糖(5.5、10、15、25 mmol/L)刺激血管平滑肌细胞(VSMCs) 24 h,或高浓度葡萄糖(25 mmol/L)处理VSMCs不同时间(0、6、12、24h),Western blot检测细胞KLF5和IL-6蛋白表达水平.③采用不同浓度(0、5、10、50、100、200 μmol/L)桑黄素干预VSMCs细胞24h后,MTT法检测并计算细胞生长抑制率.④将VSMCs细胞分为空白组、高糖组、桑黄素组和高糖+桑黄素组.先给予高糖组和高糖+桑黄素组细胞25 mmol/L葡萄糖刺激24h后,再给予桑黄素组和高糖+桑黄素组细胞10 μmol/L桑黄素干预24h,Western blot检测各组细胞KLF5和IL-6蛋白表达水平.⑤应用转染技术构建KLF5过表达的VSMCs细胞,将细胞分为空白组、KLF5过表达组、桑黄素组和KLF5过表达+桑黄素组,细胞转染6h后,桑黄素组和KLF5过表达+桑黄素组细胞给予10 μnol/L桑黄素干预24h,Western blot检测各组细胞KLF5和IL-6蛋白表达水平.结果:①与正常对照组相比,模型组小鼠出现明显的血管平滑肌细胞增生及紊乱,并有斑块形成;且血管组织KLF5和IL-6的mRNA表达量显著增加(P＜0.01).桑黄素能有效抑制糖尿病小鼠的血管病变,并显著下调KLF5和IL-6的mRNA表达量(P＜0.01).②葡萄糖可以诱导VSMCs细胞KLF5和IL-6蛋白表达增加(P＜0.01),且呈浓度和时间依赖性.选择25 mmoL/L葡萄糖干预24h作为模型诱导条件.③随着桑黄素浓度增加,VSMCs细胞的生长抑制率显著增高(P＜0.01).选择10 μmoL/L进行后续实验.④与空白组相比,高糖组细胞KLF5和IL-6蛋白表达显著升高(P＜0.01),桑黄素组细胞KLF5和IL-6蛋白表达明显降低(P＜0.01);与高糖组相比,高糖+桑黄素组细胞KLF5和IL-6蛋白表达显著下调(P＜0.01).⑤与空白组相比,KLF5过表达组细胞KLF5的mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P＜0.01),且IL-6蛋白表达水平亦显著上调(P＜0.01);与桑黄素组相比,KLF5过表达+桑黄素组细胞KLF5和IL-6蛋白表达水平显著上调(P＜0.01).结论:桑黄素可能通过抑制KLF5表达改善糖尿病血管炎性病变.
