目的:观察柯萨奇病毒B3（Coxsackievirus group B type 3,CVB3）VP1核酸疫苗pcDNA3/VP1与重组腺病毒Ad/VP1联合应用的免疫效果。方法:大量制备pcDNA3/VP1和Ad/VP1,肌肉注射免疫小鼠。4～6周龄雄性BALB/c小鼠随机分为4组:质粒组,注射pcDNA3/VP1,共3次;腺病毒组,注射Ad/VP1,共2次;质粒/腺病毒组,第1、2次注射pcDNA3/VP1,第3次注射Ad/VP1;PBS对照组。各次注射间隔时间为3周。质粒每次接种100μg/只,腺病毒每次接种4×107pfu/只。用微量中和试验和ELISA法分别检测每次免疫后血清中和抗体和IgG抗体滴度;CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性;用致死量病毒感染后检测血中病毒滴度,并观察小鼠的生存情况。结果:各实验组小鼠的中和抗体和IgG抗体水平均随免疫次数增加而提高,末次免疫后,质粒/腺病毒组血清中和抗体和特异性IgG抗体滴度（31.70±1.41,2425.15±1.86）明显高于质粒组（23.78±1.37,918.96±1.36）和腺病毒组（18.88±1.22,800.00±1.63）（P<0.05）;各实验组淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性高于PBS对照组（P<0.05）;以致死量病毒感染后,质粒/腺病毒组血清病毒滴度低于其他组（P<0.05）,生存率高于其他组（P<0.05）。结论:核酸疫苗与重组腺病毒联合应用可以明显提高免疫效果。