摘要：
目的:构建干扰半乳凝素-3(Galectin-3)的重组U6慢病毒质粒,体外评价和观察内源性小RNA干扰效果及对细胞增殖和凋亡的影响.方法: 根据siRNA设计原则,设计合成短发夹DNA,用于体内转录合成干扰Galectin-3编码序列的发夹RNA.连接,筛选,酶切,鉴定pGCL-GFWU6 Gal-3shRNA-1;以含无关序列发夹结构的质粒载体为对照,感染乳腺癌细胞系,采用RT-PER和Western Blot检测mRNA和蛋白表达水平与对照组的差别;MTT法和流式细胞检测其对细胞增殖、凋亡的干扰情况.结果: 测序证实重组质粒构建成功,体外试验表明,Galeetin-3的mRNA和蛋白表达均一致降低,转染组为(0.028%),阴性对照组为(0.617%),空白对照组为(0.992%),转染组mRNA干扰效率达95%(P<0.05);Galectin-3蛋白表达明显下调,与阴性对照组和空白对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05).MTT检测结果转染组为(0.40±3.69)%,阴性对照组(0.71±0.16)%;转染组和阴对照组问差异均有统计学意义(P<0.05).细胞凋亡百分率为68.78%.结论: 慢病毒介导的Galectin-3-shRNA成功在体外敲减了肿瘤细胞的目的蛋白,影响了肿瘤的发生与发展.
